超临界流体色谱在线净化法快速自动化测定植物油中苯并(a)芘方法

由中国材料与试验团体标准委员会综合标准领域委员会(CSTM/FC99)归口承担的《植物油苯并(a)芘测定超临界流体色谱在线净化-反相高效液相色谱法》团体标准已完成征求意见稿，按照《中关村材料试验技术联盟团体标准管理办法》的有关规定，现公开广泛征求意见。

 
3，4-苯并芘(即苯并(a)芘)被世界卫生组织列为一类致癌物，与人体DNA共价结合后可引起复制错误从而极易引发癌变。一般认为在油脂的高温工艺过程中由多环芳烃通过组合、重排产生。此外，在储存、运输或包装的过程中也易受外源污染。我国GB 2762-2017中针对部分谷物及其制品、熏烧烤肉类、熏(烤)水产品、油脂及其制品中污染物质苯并[a]芘的限量进行了规定，其中针对油脂及其制品为10ug/kg，欧盟、韩国、西班牙等规定油脂中苯并(a)芘含量不得超2ug/kg，国际食品法典委员会(CAC)也规定了食用油中苯并[a]芘蕞高限量为5ug/kg。因此准确测试食品中苯并(a)芘的含量，对食品安全的管控显得尤为重要。

目前食用油中苯并(a)芘检测手段主要有气相色谱-质谱法、高效液相色谱-荧光法和酶联免疫吸附法。当采用色谱法进行分析时，上机之前，需要对食用油样品中苯并(a)芘进行提取，对样品进行净化。前处理手段主要包括液液萃取、索氏提取和固相萃取等方法。其中，固相萃取结合液相色谱荧光检测法对干扰基质净化能力好，检测灵敏度高，作为国际标准方法ISO15302-2017和国标方法GB5009.27-2016被广泛使用。但是现有标准中的固相萃取的前处理手段，操作步骤仍然繁琐费时，对实验人员技术水平要求较高，无法满足快速准确检的需求。而且仍然需要使用大量有毒有害化学试剂，不仅成本高，而且不环保。

本项目通过采用先进环保的超临界流体色谱分离技术，实现了植物油样品的在线净化和苯并(a)芘的快速自动化检测，而且降低了样品前处理过程中有机溶剂的使用成本，为植物油当中苯并(a)芘的快速监测和植物油的质量管理提供了有力的工具。此外，该方法准确可靠，具有普遍适用性，易于推广使用。

本标准参照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》，GB/T 20001.4《标准编写规则第4部分：试验方法标准》的规定起草。本标准规定了用超临界流体色谱在线净化法快速自动化测定植物油中苯并(a)芘的方法。

本标准规范性引用文件包括：GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法；GB 5009.27食品安全国家标准食品中苯并(a)芘的测定；ISO 15302动植物油脂苯并(a)芘的测定反相高效液相色谱法(Animal and vegetable fats and oils-Determination of benzo[a]pyrene-Revers-phase high performance liquid chromatography method)。

方法原理：

样品经正己烷溶解后，使用超临界流体色谱(SFC)-反相液相色谱(RPLC)二维系统对该溶液进行在线超临界流体色谱分离净化后，用中心切割的方式将苯并(a)芘导入到第二维的反相高效液相色谱系统进行分离，荧光检测器检测，外标法定量。

仪器和设备：

1.超临界流体色谱—反相液相色谱联用系统：配有高压两位六通阀和荧光检测器(见附录A中图A.1和A.2)。或性能相当者。2.涡旋振荡器。3.分析天平：感量为0.01 mg和1 mg。4.玻璃具塞刻度试管：10 mL。5.玻璃样品瓶：约1mL，配有可密封的盖子。

在重复性条件下，获得两次独立测量结果的绝对差值不大于重复性限r，以大于重复性限r的情况不超过5%为前提。

在再现性条件下，获得的两次独立测量结果的绝对差值不大于再现性R，以大于再现性限R的情况不超过5%为前提。

实验报告：

试验报告的内容应包括以下部分或全部：a)试验项目名称及本标准编号；b)样品信息；c)测试环境条件；d)试验设备；e)测试方法的任何偏离；f)测试结果；g)测试日期、试验人员及其他。

本标准适用于植物油中质量分数为0.5μg/kg(注：定量限)~50μg/kg的苯并(a)芘的测定。