液相色谱仪分析方法的开发流程

我们就以未知化合物为例。

分离模式的选择

我们先测试样品的溶解性：如果在烷烃试剂中溶解性好，那么可首选正相模式开发方法，色谱柱主要以硅胶柱为主，流动相可以选择正己烷-乙醇、二氯甲烷-甲醇；

如果在二氯甲烷或乙醇中溶解性好，那么可以选用正相模式，或者反相模式中的纯有机模式，色谱柱可以用硅胶柱、C18或C8，反相的流动相可以用甲醇-乙腈、乙腈-二氯甲烷；

如果在水、甲醇或乙腈中溶解性好，那么可以选用反相模式、Hilic模式或离子交换模式，反相流动相可以用水-甲醇、水-乙腈，HILIC的流动相可以用乙腈-水，离子交换流动相可以用缓冲盐浓度梯度洗脱、或pH的梯度洗脱。

反相流动相pH的选择

如果是分析酸性化合物，我们选择流动相的pH应低于其pKa至少2个pH单位；如果是分析碱性化合物，流动相的pH应高于其pKa至少2个pH单位。

检测器的选择

确定待测物结构上是否有紫外强吸收化学键（异戊二烯），可以用DAD检测器看一下紫外吸收强度范围，选取合适的分析波长；如果结构上没有双键，则不能用紫外检测器，可以考虑示差折光检测器（RI）；如果待测物沸点较高（大于400℃），则可以选择蒸发光散射检测器（ELSD）或电喷雾检测器（CAD）；如果需要确定分子量，可以连接质谱检测器。

流动相梯度或等度条件的确定

我们可以先跑一个大梯度，比如反相用水和乙腈流动相，可以用乙腈的比例从5%逐渐增至95%，根据出峰情况，再去优化放缓梯度。