纸色谱法工作原理及操作方法

纸色谱法又称纸层析法，是用纸作为载体，通过分裂系的在同一介质中分散速度不同来分析样品成分的色谱法，具有微量、快速、高效和敏捷度高等特点。从原理上来说，纸色谱涉及分配、吸附和离子交换等机理，相对复杂，但是分配机理起主要作用，因此纸色谱法属于分配色谱。

由于纸色谱法适用于多官能团或高极性的亲水化合物如醇类、羟基酸、氨基酸、糖类和黄酮类等化合物的分离检验，因此在岩矿分析与鉴定以及药品检测领域有较为广泛的应用。

其中，用于药品检测时根据检测内容的不同，采取的措施也不同。具体来说，当采用纸色谱法进行药品鉴别时，供试品在色谱图中所显主斑点的位置与颜色(或荧光)，应与对照标准物质在色谱图中所显主斑点相同；进行药品纯度检查时，取一定量的供试品，经展开后，按各品种项下的规定，检视其所显杂质斑点的个数和呈色深度(或荧光强度)；进行药品含量测定时，将待测色谱斑点剪下经洗脱后，再用适宜的方法测定。

纸色谱法的准备工作

纸色谱法根据操作方法的不同又可以分为上行法与下行法，不过用到的仪器和材料大同小异。

进行纸色谱分析前应准备好展开容器(通常为圆形或长方形玻璃缸，缸上具有磨口玻璃盖，应能密闭)、点样器、色谱滤纸。其中点样器需要保证能使点样位置正确、集中，一般采用平口微量注射器或定量毛细管(无毛刺)；而色谱滤纸需做到质地均匀平整，具有一定机械强度不含影响展开效果的杂质，也不会与所用显色剂起作用，以免影响分离和鉴别效果，必要时可进行处理后再用。

而在进行上行法时，需要在展开容器盖上的孔中加塞，塞中插入玻璃悬钩，以便将点样后的色谱滤纸挂在钩上，并除去溶剂槽和支架，并且使用的色谱滤纸长控制在 25cm左右，宽度则按需要而定，必要时可将色谱滤纸卷成筒形，点样基线距底边约 2.5cm。

进行下行法时，需要在支架架起展开容器，并用玻棒压住色谱滤纸，同时，色谱纸按纤维长丝方向切成适当大小的纸条，使色谱滤纸上端能足够浸入溶剂槽内的展开剂中，并使点样基线能在溶剂槽侧的玻璃支持棒下数厘米处，必要时，可在色谱滤纸下端切成锯齿形便于展开剂向下移动。

纸色谱法的操作方法

进行纸色谱法时，应先将供试品溶解于适宜的溶剂中制成一定浓度的溶液，然后用微量注射器或定量毛细管吸取溶液，点于点样基线上，一次点样量不超过 10µl。

如果采用的是上行法，则应该在展开容器中加入适量展开剂，静置至展开剂蒸气饱和后，再下降悬钩，使色谱滤纸浸入展开剂约 1cm，展开剂即经毛细作用沿色谱滤纸上升，除另有规定外，一般展开至约 15cm 后，取出晾干，按规定方法检视。展开可以单向展开，即向一个方向进行；也可进行双向展开，即先向一个方向展开、取出，待展开剂完全挥发后，将滤纸转动 90°，再用原展开剂或另一种展开剂进行展开。亦可多次展开和连续展开等。

如果采用下行法，则应该将点样后的色谱滤纸的点样端放在溶剂槽内并用玻棒压住，使色谱滤纸通过槽侧玻璃支持棒自然下垂，点样基线在压纸棒下数厘米处。展开前，展开缸内用各品种项下规定的溶剂的蒸气使之饱和，一般可在展开缸底部放一装有规定溶剂的平皿，或将被规定溶剂润湿的滤纸条附着在展开缸内壁上，放置一定时间，待溶剂挥发使缸内充满饱和蒸气。然后小心添加展开剂至溶剂槽内，使色谱滤纸的上端浸没在槽内的展开剂中。展开剂即经毛细作用沿色谱滤纸移动进行展开，展开过程中避免色谱滤纸受强光照射，展开至规定的距离后，取出色谱滤纸，标明展开剂前沿位置，待展开剂挥散后，按规定方法检测色谱斑点。